SPEKTROFOTOMETRI UV MULTIKOMPONEN PENETAPAN KADAR INH DAN VITAMIN B6

MAKALAH ANALISIS INSTRUMENTAL

MODUL IV

SPEKTROFOTOMETRI UV MULTIKOMPONEN

PENETAPAN KADAR INH DAN VITAMIN B6

Disusun Oleh:

Kelompok : A 5

Anggota : 1) Eka Setianisa (K 100 110 008)

2) Eka Prasna P. (K 100 110 013)

3) Dyah Riswari Pitaloka S. (K 100 110 036)

4) Eldesi Medisa I. (K 100 110 038)

Korektor :

LABORATORIUM ANALISIS INSTRUMENTAL

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA

2012

ABSTRAK

Metode persamaan simultan dilakukan dengan mengukur 2 atau lebih panjang gelombang yang mana masing-masing komponen tidak akan menganggu. Kromofor yang berbeda-beda dari tiap komponen akan mempunyai keuatan absorbs cahaya yang berbeda pula pada satu daerah panjang gelombang. Pengukiran dilakukan pada masing-masing larutan pada tiap panjang gelombang (menurut banyaknya komponen), sehingga diperoleh persamaan hubungan antara absorbansi dengan konsentrasi pada panjang gelombang tersebut.

PENDAHULUAN

DASAR TEORI

Spektrofotometri serap adalah pengukuran serapan radiasi elektromagnetik panjang gelombang tertentu yang smpit, mendekati monokromatik yang diserap zat. Pengukuran serapan dapat dilakukan pada daerah ultraviolet (

190 – 380 nm) atau pada daerah cahaya tampak (

380 – 780 nm). Daya serap atau serapan jenis zat pada batas-batas kadar tertentu adalah tetap, tidak tergantung dari intensitas radiasi, panjang jalan sinar dan kadar larutan, sehingga spektrofotometri serap dapat digunakan untuk penetapan kadar.

Alat spektrofotometer pada dasarnya terdiri atas sumber sinar monokromator, tempat sel untuk zat yang diperiksa, detector, penguat arus, dan alat ukur atau pencatat. Spektrofotometer dapat bekerja secara otomatik ataupun tidak, dapat mempunyai system sinar tunggal atau ganda.

(Anonim, 1979)

Bagian molekul yang mengabsorbsi dalam daerah ultraviolet dan daerah sinar tampak dinyatakan sebagai kromofor. Dalam satu molekul dapat dikandung beberapa kromofor. Jika kromofor dipisahkan satu sama lain paling sedikit oleh dua atom karbon jenuh, maka tidak ada kemungkinan adanya konjugasi antara gugus kromofor.

(Hermann dan Gottfried, 1998)

Aspek Kualitatif

Data spektra UV secara tersendiri tidak dapat digunakan untuk identifikasi kualitatif obat atau metabolitnya. Akan tetapi digabung dengan cara lain seperti Spektrostopi Inframerah, resonansi magnet inti, dan spektrostopi massa, dapat digunakan untuk maksud identifikasi/analisis kualitatif senyawa tersebut.

Aspek Kuantitatif

Dalam aspek kuantitatif, suatu berkas radiasi dikenakan pada cuplikan (larutan sampel) dan intensitas sinar radiasi yang diteruskan diukur besarnya.

Analisis 2 campuran secara bersama-sama

Bila diinginkan pengukuran 2 buah senyawa secara bersama-sama secara spektrofotometri, maka dapat dilakukan pada 2 panjang gelombang yang mana masing-masing komponen tidak saling mengganggu atau gangguan dari komponen yang lain paling kecil. Dua buah kromofor yang berbeda akan mempunyai kekuatan absorbsi cahaya yang berbeda pula pada satu daerah panjang gelombang. Pengukuran dilakukan pada masing-masing larutan pada dua panjang gelombang, sehingga diperoleh dua persamaan hubungan antara absorbansi dengan konsentrasi pada dua panjang gelombang, akibatnya konsentrasi masing-masing komponen dapat dihitung.

(Gandjar, 2007)

TUJUAN

Praktikan diharapkan mampu menetapkan kadar INH dan vitamin B6 dalam sampel yang mengandung dua komponen atau lebih menggunakan alat spektrofotometer UV dengan metode persamaan simultan.

METODOLOGI

ALAT DAN BAHAN

- Alat

1. Spektrofotometer UV

2. Kuvet

3. Labu takar 10 mL

4. Bekker glass 100 mL

5. Pipet volume

6. Mikropipet

7. Propipet

8. Erlenmeyer

9. Timbangan analitik

10. Pipet tetes

- Bahan

1. Tablet yang mengandung INH dan vitamin B6

2. Aquadest

3. Larutan baku INH 0,1 %

4. Larutanbaku Vitamin B6 0,1 %

PROSEDUR RESMI

Vitamin B6 (Piridoxin Hidroklorida)

Golongan analisis : V

Pemerian : C₈H₁₂NO₃Cl (205,6), titik leleh 210^oC, bubuk kristal putih, tak berbau, rasa asam-pahit.

Kelarutan dalam	air	Etanol	aseton	Eter	kloroform
	1 : 8	1 : 100	Tak larut	Tak larut	Tak larut

Pemeriksaan kualitatif :

1) Reaksi besi (III) klorida : warna merah

2) Ke dalam campuran 2 mL larutan asam sulfanilat terdiazotasi dalam 1 mL 3 N = NaOH ditambah kira0kira 5 mg zat. Larutan berwarna kuning tua sampai jingga kemudian ditambahkan 2 mL 3 N asam asetat, berubah menjadi merah.

3) Ke dalam larutan 50 mg zat dalam 1 mL air ditambahkan 1 tetes larutan tembaga sulfat 2% dan 1 mL 3 N NaOH, terbentuk warna biru ungu.

4) Sejumlah 1 mg zat, dilarutkan dalam 10 mL air, ke dalam 1 mL larutan diklorkinon kloremida 0,04% dalam etanol mutlak dan 1 tetes larutan 6 N amoniak, terbentuk warna biru, ke dalam 1 mL larutan lainnya, ditambah larutan asam benzoate 3% 1 mL diklorkinon klorimida dan 1 tetes larutan amoniak, tidak timbul warna biru.

Pemeriksaan kuantitatif:

1) Titrasi : Larutan zat dalam asam asetat (ditambahkan larutan raksa (II) asetat) dititrasi dengan 0,03 N asam perklorat (1/20 mmol) sampai timbul warna biru. Indikator 3 tetes larutan ngu Kristal.

dalam air : 220 pada 254 nm

425 pada 324 nm.

Isoniazid (INH)

Golongan analisis : IV, V

Pemerian : C₆H₇H₃0 (137,1), jarak cair 170 – 174^oC, Kristal putih, rasa pahit.

Kelarutan dalam	air	Etanol	aseton	Eter	kloroform
	1 : 8	1 : 45	1 : 1000	Tak larut	1 : 1000

Pemeriksaan kualitatif :

1) Isoniazid (INH) mereduksi larutan Perak Nitrat, Amoniak, pereaksi Fehling, dan larutan Kalium Permanganat dingin.

2) Larutan 50 mg zat direaksikan dengan 1 mL larutan 2,4 di-nitroklorobenzol (1,0 gr/100 m² etanol dibuat segera) dan 4 tetes 3 N NaOH. Dalam waktu singkat, terbentuk larutan merah coklat yang tidak berubah sekalipun diencerkan dengan air.

3) Sejumlah 20 mg zat dan 100 mg Natrium Karbonat kering dipanaskan pada kaca porselen, tercium bau piridin.

Pemeriksaan kuantitatif:

1) Titrasi : Larutan zat dalam 18 mL Asam Asetat bebas air dan 2 mL Anhidrida Asetat dititrasi dengan 0,05 N Asam Perklorat (1/20 mmol) sampai timbul warna hijau. Indikator 1 tetes larutan ungu kristal.

dalam air : 380 pada 266 nm.

CARA KERJA

1. Menentukan / Mencari Harga

· INH

dalam air = 380 pada 266 nm

· Vitamin B6

dalam air = 220 pada 254 nm

425 pada 324 nm

2. A. Penetapan Larutan Stok INH 0,1 %

Ditimbang 100 mg INH.

Dimasukkan ke dalam labu takar.

Ditambah pelarut air ad 100 mL.

Dibuat larutan stok baku INH 0,1 %.

Nb: sudah tersedia di laboratorium

B. Penetapan Larutan Stok Vitamin B6 0,1 %

Ditimbang 100 mg Vitamin B6.

Ditambah pelarut air ad 100 mL.

Dibuat larutan stok baku Vitamin B6 0,1 %.

Nb: sudah tersedia di laboratorium

3. A. Ditentukan

max

Diambil 100

L larutan stok INH 0,1 % b/v

Dimasukkan ke dalam labu takar 10 mL.

Ditambah pelarut air ad 10,0 mL.

Dimasukkan ke dalam kuvet.

Diukur resapannya pada berbagai panjang gelombang untuk menentukan

max.

range : 200 – 400 nm.

B. Diambil 100

L Larutan Stok Vitamin B6 0,1 %

Dimasukkan dalam labu takar 10 mL.

Ditambah aquadest ad 10 mL.

Dimasukkan ke dalam kuvet.

Diukur resapannya pada berbagai panjang gelombang untuk menentukan

max.

4. A. Pengukuran Absorbansi

Diambil 100

L larutan stok INH 0,1 % b/v

Dimasukkan ke dalam labu takar dan ditambahkan air ad 10 mL.

Dimasukkan ke dalam kuvet.

Dibaca absorbansinya pada setiap panjang gelombang max pada

INH (265 nm) dan

Vitamin B6 (324,5 nm).

B. Diambil 200

L Larutan Stok Vitamin B6 0,1 %.

Dimasukkan dalam labu takar dan ditambahkan air ad 10 mL.

Dimasukkan ke dalam kuvet.

Dibaca absorbansinya pada setiap panjang gelombang max pada

INH (265 nm) dan

Vitamin B6 (324,5 nm).

5. Dihitung Nilai E Masing-Masing Komponen pada Tiap Panjang Gelombang (dengan persamaan Lambert Beer)

A =

. b . c

Didapatkan 2 buah persamaan :

A pada

265 nm = 373 CA + 153,5

A pada

324,5 nm = 41 CA + 381 CB

6. Diukur Absorbansi Larutan Sampel pada Tiap Gelombang Maximum tersebut

Ditimbang 100,0 mg sampel (serbuk).

Dimasukkan ke dalam labu takar 10,0 mL dan ditambah aquadest ad 10 mL.

Diambil 25

L dan dimasukkan labu takar 10,0 mL.

Ditambah aquadest ad 10 mL.

Dimasukkan ke dalam kuvet.

Dibaca absorbansi pada

max INH (265 nm) dan

max Vitamin B6 (324,5 nm).

Dimasukkan data absorbansi tersebut ke dalam 2 persamaan yang didapat.

Diselesaikan persamaan tersebut dengan metode eliminasi untuk mencari kadar senyawa yang dianalisis.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Senyawa Vitamin B6		Senyawa INH
Pelarut	220 pada 254 nm 425 pada 324 nm Aquadest	Pelarut	320 pada 266 nm
Larutan stok yang dibuat	0,1 (%)	Larutan stok yang dibuat	0,1 (%)
	Berat (mg)		Berat (mg)
Kertas kosong Kertas + zat Kertas + zat sisa *Berat zat		Kertas kosong Kertas + zat Kertas + zat sisa *Berat zat
Penentuan max		Penentuan max
Konsentrasi larutan = 0,002 % V₁ . C₁= V₂ . C₂ V₁ . 0,1= 10 . 0,002 V₁ = 0,2 mL Diambil 0,2 mL larutan stok (0,1%) diambah pelarut (aquadest) ad 10 mL.		Konsentrasi larutan = 0,002 % V₁ . C₁= V₂ . C₂ V₁ . 0,1= 10 . 0,001 V₁ = 0,1 mL Diambil 0,1 mL larutan stok (0,1%) diambah pelarut (aquadest) ad 10 mL.
Data pencarian max		Data pencarian max
nm	Abs	nm	Abs
324,5	0,748	265,0	0,312
Berdasarkan data di atas, maka max senyawa Vitamin B6 = 324,5 nm		Berdasarkan data di atas, maka max senyawa INH = 265,0 nm

Pembacaan Absorbansi pada

max

Senyawa	Konsentrasi (%) b/v	Nilai Absorbansi (A)		Senyawa	Konsentrasi (%) b/v	Nilai Absorbansi (A)
INH INH	0,001 % 0,001 %	0,374 0,372	0,037 0,045	Vit. B6 Vit. B6	0,002 % 0,002 %	0,299 0,315	0,752 0,771
Rata-Rata		0,374	0,041	Rata-Rata		0,307	0,762

Perhitungan Nilai E Masing-Masing Senyawa

Senyawa INH pada

265 nm ; 0,373 =

A . 1 . 0,001

A₁ = 373

Senyawa INH pada

324,5 nm ; 0,041 =

A . 1 . 0,001

A₂ = 41

Senyawa INH pada

265 nm ; 0,307 =

B . 1 . 0,001

B₁ = 153,5

Senyawa INH pada

324,5 nm ; 0,767 =

B . 1 . 0,001

B₂ = 381

CA = INH

CB = Vitamin B6

Persamaan yang didapat :

A pada

265 nm : 373 CA + 153,5 CB = ………......... persamaan (1)

A pada

265 nm : 41 CA + 381 CB = ……………….. persamaan (2)

Pengukuran absorbansi sampel

Data Orientasi

	Berat (mg)	Add 10 mL	Larutan yang dibaca 25L ad 10 mL	Fp 400 x	Nilai Absorbansi (A)
					Pada max 1 265,0 nm	Pada max 2 324,5 nm
Berat kertas	0,2670				0,632	0,042
Berat kertas + zat	0,3679
Berat kertas + zat sisa	0,2672
Berat zat	0,1007

Data Replikasi

	Berat (mg) (A)	Berat (mg) (B)	Berat (mg) (C)
Berat kertas	0,2682	0,2670	0,2650
Berat kertas + zat	0,3682	0,3672	0,3655
Berat kertas + zat sisa	0,2694	0,2672	0,2654
Berat zat	0,099	0,1000	0,1001

		Add 10 mL	Larutan yang dibaca 25L ad 10 mL	Fp 400 x	Nilai Absorbansi (A)
		Add 10 mL	Larutan yang dibaca 25L ad 10 mL	Fp 400 x	Pada max 1 (265,0 nm)	Pada max 2 (324,5 nm)
R I	A				0,631; 0,727	0,035; 0,040
R II	B				0,679; 0,559	0,032; 0,029
R III	C				0,746; 0,575	0,041; 0,026

Rata-rata :

max 1

R I = 0,679

R II = 0,619

= 265 nm

R III = 0,661

max 1

R I = 0,0375

R II = 0,0305

= 324,5 nm

R III = 0,0335

Konsentrasi awal

A = CA = 75,47 % ^b/_v CB = -1,036 . 10^-⁴% ^b/_v

B = CB = -5 % ^b/_b CA = 78,54% ^b/_v

C = CA = 74,31 % ^b/_b CB = -4,144 % ^b/_b

PERHITUNGAN

Orientasi

0,632 = 373 CA + 153,5 CB × 381

0,042 = 41 CA + 381 CB × 153,5

240,792 = 142.113 CA + 58.483,5 CB

6,447 = 6.447 CA + 58.483,5 CB _

243,345 = 135666 CA

CA = 1,727 × 10^-3 % ^b/_v× 400

CA = 0,691 % ^b/_v

× 100 %

× 100 % = 68,62 % ^b/_b

0,042 = 41 CA + 381 CB

0,042 = 41 (1,727 × 10^-3) + 381 CB

0,042 = 0,071 + 381 cb

CB = -7,612 × 10^-5% ^b/_v

× 100 %

= -7,559 × 10^-5% ^b/_b

Replikasi I

0,632 = 373 CA + 153,5 CB × 381

0,0375 = 41 CA + 381 CB × 153,5

258,699 = 142.113 CA + 58.483,5 CB

5,75625 = 6293,5 CA + 58.483,5 CB _

252,943 = 135419,5 CA

CA = 1,868 × 10^-3 % ^b/_v× 400

CA =

× 100 % = 75,47 %

× 100 % = 68,62 % ^b/_b

0,0375 = 41 (1,868 × 10^-3) + 381 CB

0,0375 = 0,07658 + 381 CB

-0,03908 = 381 CB

-1,0257 × 10^-4 = CB

-1,0257 × 10^-4 ^b/_v = CB

= -1036 × 10^-4% ^b/_b

₌-4,144 % ^b/_b

Replikasi II

0,679 = 373 CA + 153,5 CB × 381

0,0305 = 41 CA + 381 CB × 373

27,84 = 15293 CA + 6293,5 CB

11,38 = 152,93 CA + 142113 CB _

16,46 = -135819,5 CB

CB = -1,2119 × 10^-4 % ^b/_v× 400

= 0,05 % ^b/_v

= 0,05 % ^b/_b× 100 % = -5 % ^b/_b

0,0305 = 41 CA + 381 CB

0,0305 = 41 CA + 381 (-1,2119 × 10^-4 )

0,0305 = 41 CA + (-0,05)

CA = 1,963 × 10^-3 % ^b/_v

× 100 % = 0,196 × 400

= 78,54 % ^b/_b

Replikasi II

0,661 = 373 CA + 153,5 CB × 381

0,0335 = 41 CA + 381 CB × 373

251,841 = 142113 CA + 6293,5 CB

5,14225 = 6293,5 CA + 142113 CB _

251,8358 = 135419,5 CA

CA = 1,8596 × 10^-3 % ^b/_v

CA =

× 100 % = -5 % ^b/_b

= 0,185 × 400

= 74,31 % ^b/_b

0,0335 = 41 (1,8596 × 10^-3) + 381 CB

0,0335 = 0,076 + 381 CB

-1,115 × 10^-4 = CB

-1,115 × 10^-4 × CB

CB =

× 100 % = -4,46 % ^b/_b

Kadar INH rata-trata =

= 76,107 %^b/_b

Kadar Vitamin B6 rata-rata =

= -3,048 %^b/_b

EVALUASI HASIL

x	x	d\| x - x	d²
75,47 78,54 74,31	76,107	0,637 2,433 1,797	0,406 5,919 3,229
Jumlah d = 4,867			d² = 9,554

d =

= 1,622

SD =

= 2,186

Data yang dicurigai = 78,54 % ^b/_b

Harga ditolak jika

> 2,5

= 1,5 < 2,5 = 78,54 %^b/_b(Jadi harga diterima)

P = 0,95; n = 3; t = 2,353

Kadar INH = x± t ×

= 76,107 ± 2,353 ×

= (76,107 ± 2,96971) %^b/_b

Kadar Vitamin B6

x	x	d\| x - x	d²
1,036 × 10^-4 -5 -4,144	-3,048	3,048 1,952 1,096	9,290 3,810 1,201
Jumlah d = 6,096			d² = 14,301

d =

= 2,032

SD =

= 2,674

Data yang dicurigai = 1,036 × 10^-4

Harga ditolak jika

> 2,5

= 1,5 < 2,5 = 78,54 %^b/_b(Jadi harga diterima)

P = 0,95; n = 3; t = 2,353

Kadar Vitamin B6 = x± t ×

= -3,048± 2,353 ×

= (-3,048 ± 3,633) %^b/_b

PEMBAHASAN

Praktikum ini dilakukan untuk menetapnkan kadar senyawa dalam sampel yang mengandung dua komponej atau lebih, menggunakan alat spektrofotometer UV dengan metode persamaan simultan.

Praktiku ini menggunakan metode persamaan simultan karena metode ini dapat mengukur lebih dari satu komponen dalam senyaqwa, yang mempunyai serapan pada panjang gelombang yang berdekatan, hal ini dapat terjadi karena metode persamaan simultan dilakukan dengan mengukur pada 2 atau lebih panjang gelombang yang mana masing-masing komponen tidak akan menganggu. Kromofor yang berbeda-beda dari tiap komponen yang akan mempunyai kekuatan absorbs cahaya yang berbeda pula pada satu daerah panjang gelombang. Tetapi tidak dapat digunakan untuk senyawa yang mempunyai gugus kromofor sama.

Sampel yang digunakan dalah tablet yang mengandung INH (Isoniazid) dan Vitamin B6. INH dan Vitamin B6 mempunyai gugus kromofor yang berbeda, maka data ditetapkan kadarnya menggunakan metode simultan. Kromofor adalah gugus atau system yang bertanggung jawab pada penyerapan sinar yang merupakan gugus tidak jenuh yang dapat menyerap radiasi dalam daerah UV-Vis. Penyerapan sejumlah energi tersebut akan menghasilkan transisi electron dan orbital bereksitasi. Eksitasi adalah transisi atau perpindahan electron dari orbital rendah ke orbital yang tinggi.

Izoniazid mempunyai harga

dalam pelarut air adalah 380 pada

266 nm. Yang artinya Isoniazid dengan kadar 1 % ^b/_v dibaca absorbansinya pada

266 nm dengan kuvet setelah 1 cm akan didapat absorbansinya ± 380. Sedangkan Vitamin B6 mempunyai harga

dalam pelarut air 220 pada

254 nm dan 425 pada

324 nm.

Larutan stok baku INH dan Vitamin B6 sudah tersedia dengan kadar 1 % ^b/_v dengan masing-masing pelarut aquadest. Pada penentuan

max, berdasarkan harga

zat, untuk menghitung berapa konsentrasi yang digunakan, diperoleh konsentrasi larutan INH yang digunakan adalah 0,001 %^b/_v dan didapat

max 324,5 nm dengan absorbansi 0,748. Sedangkan konsentrasi Vitamin B6 yang digunakan adalah 0,002 %^b/_vdan didapat

max 265,0 nm dengan absorbansi 0,312. Penentuan

max ini dilakukan pada

200 nm – 400 nm untuk UV.

Pada praktikum, pembacaan absorbansi dilakukan pada

maxkarena kepekaannya juga maksimal, perubahan absorbansi untuk setiap satuan konsentrasi adalah yang paling besar, di sekitar

max, bentuk kurva absorbansinya datar (hokum Lambert-Beer akan terpenuhi) dan jika dilakukan pengukuran ulang maka keslahan yang isebabkan oleh pemasangan ulang panjang gelombang akan kecil sekali ketika digunakan

max.

Pada metode persamaan simultan, pengukuran dilakukan pada masing-masing larutan pada tiap panjang gelombang, sehingga diperoleh persaman hubungan antara absorbansi dengan konsentrasi. Dilakukan pembacaan absorbansi senyawa INH dengan kadar 0,001 %^b/_v pada

max 1 (265 nm) diperoleh absorbansi 0,374 dan

max 2 (324,5 nm) diperoleh absorbansi 0,037. Pembacaan dilakukan dua kali. Dengan kadar INH 0,001 %^b/_v dibaca pada

max 1 (265 nm) diperoleh absorbansi 0,372 dan

max 2 yaitu 324,5 nm 0,045. Diperoleh rata-rata absorbansi untuk INH 0,001 %^b/_v

max 1 (265 nm) adalah 0,373 dan pada

max 2 (324,5 nm) diperoleh absorbansi 0,041. Untuk pembacaan absorbansi Vitamin B6 kadar 0,002 %^b/_v pada

max 1 (265 nm) diperoleh absorbansi 0,299 dan pada

max 2 (324,5 nm) diperoleh absorbansi 0,0752. Pembacaan dilakukan 2 kali seperti INH dan diperoleh absorbansi Vitamin B6 pada

max 1 (265 nm) adalah 0,315 dan pada

max 2 (324,5 nm) adalah 0,771. Dan diperoleh kadar rata-rata absorbansi Vitamin B6 pada

max 1 (265 nm) adalah 0,0,307 dan pada

max 2 (324,5 nm) adalah 0,762. Berdasarkan hokum Lambert-Beer yang menyatakan bahawa intensitan yang diteruskan oleh larutan zat penyerap berbanding lurus dengan tebal dan konsentrasi larutan.

A =

. b . c

Sehingga diketahui bahwa absorbansi (A) berbading lurus dengan absortivitas (

), tebal kuvet (b), dan konsentrasi (c). supaya nilai b tetap, maka selama pengukuran digunakan kuvet dengan ketebalan yang sama. Dala hokum Lambert-Beer terdapat beberapa pembatasan yaitu sukar digunakan dianggap monokromatis, penyerapan terjadi dalam suatu voume yang mempunyai penampang luas yang sama, senyawa yang menyerap dalam lautan tersebut, dan tidak terjadi peristiwa fluorosensi dan fosforesensi. Dan didapat persamaan :

A pada

265 nm : 373 CA + 153,5 CB = ………......... persamaan (1)

A pada

265 nm : 41 CA + 381 CB = ……………….. persamaan (2)

Kemudian diukur absorbansi sampel, tetapi karena sampel dalam bentuk tablet maka berat satu tablet ditimbang kemudian digerus dan dibuat larutan terlebih dahulu. Dengan cara sampel ditimbang 100,0 mg dengan seksama yang dilakukan pada neraca analitik kepekaan 0,1 mg. menimbang seksama yang dimaksud adalah deviasi penimbangan tidak boleh lebih dari 0,1 % dari berat zat yang ditimbang. Selanjutnya dilakukan dengan pelarut yang sama dengan larutan stok baku yaitu aquadest dalam labu takar 10,0 mL kemudian disaring supaya larutan jernih, karena bila tidak jernih bisa terjadi penghamburan warna pada saat pembacaan absorbansinya.

Pada pembacaan absorbansi, larutan diambil 25µL dan ditambahkan aquadest ad 10,0 mL dalam labu takar. Dilakukan orientasi pada pembacaan

max 1 (265 nm) didapat absorbansi 0,632, pada

max 2 (324,5 nm) didapat absorbansi 0,042. Pada

max 1 (265 nm), absorbansi rata-rata dari ketiga replikasi adalah 0,679; 0,619; 0,661. Pada

max 2 (324,5 nm) absorbansi rata-rata dari ketiga replikasi adalah 0,0375; 0,0305; 0,0335. Dengan persamaan sebelumnya dapat dihitung konsentrasi sampel. Konsentrasi rata-rata INH dalam sampel yang didapat adalah 76,107 % ^b/_bdan konsentrasi Vitamin B6 rata-rata dalam sampel adalah -3,048 % ^b/_b. hasil yang diperoleh Vitamin B6 dalam sampel adalah negatif, maka dimungkinkan dalam sampel kadar kafein sudah berkurang atau bahkan sudah tidak ada. Tetapi hasil ini dapat juga dimungkinkan karena ada beberapa factor kesalahan dalam praktikum seperti menimbang sampel kurang teliti, pada saat pembuatan larutan untuk dibaca absorbansinya, mengadkannya kurang tepat, dan pada saat pengambilan larutan dengan mikropipet kurang benar. Pada saat pembacaan absorbansi semua larutan, digunakan larutan blanko yaitu aquadest (sama seperti pelarut). Karena blanko berfungsi untuk menetralkan atau menghilangkan absorbansi dari pelarut dalam sampel, sehingga yang terbaca pada alat absorban hanya absorbansi dari sampel tanpa ada gangguan dari pelarut.

Dari evaluasi hasil didapatkan kadar INH dalam tablet tersebut adalah (76,107 ± 2,9697) % ^b/_bdan untuk kadar Viamin B6 dalam tablet adalah (-3,048 ± 3,633) % ^b/_b.

KESIMPULAN

1) Sampel mengandung INH dan Vitamin B6 dapat ditetapkan darnya dengan metode persamaan simultan, karena INH dan Vitamin B6 mempunyai gugus kromofor.

2) Hasi negatif pada Vitamin B6 dapat diartikan bahwa masih terbacanya INH pada pembacaan karena mempunyai

yang tidak begitu jauh.

3) Dari hasil percobaan diperoleh kadar dalam sampel =

INH = (76,107 ± 2,9697) % ^b/_b

Vitamin B = (-3,048 ± 3,633) % ^b/_b.

DAFTAR PUSTAKA

Anonim. 1979. Farmakope Indonesia Edisi III. Depkes RI. Jakarta

Auterhoff dan Kovar. 2002. Identifikasi Obat. ITB. Bandung. 165

Gandjar, Ibnu Gholib dan Rohman. 2007. Kimia Farmasi Analisi. Pustaka Pelajar. Yogyakarta. 249

Roth, Hermann. J. dan Blaschke, Gottfried. 1988. Analisi Farm asi.UGM. Yogyakarta. 368-369